卫生部监督司关于公开征求《除菌产品除菌效果检测与评价方法》意见的函

卫生部监督司关于公开征求《除菌产品除菌效果检测与评价方法》意见的函

　 2004-12-10 19:26:07

卫监督食便函[2004]185号
 
卫生部监督司关于公开征求《除菌产品除菌效果检测与评价方法》意见的函
 
有关单位：
为加强对部分宣传除菌功能产品的管理，我司组织制定了《除菌产品除菌效果检测与评价方法》，现公开征求过意见，请各有关单位于2005年1月15日前将意见反馈我司。
联系人：房军
电话：010-68792407
传真：010-68792408 
E-mail:[email protected]
附件：《除菌产品除菌效果检测与评价方法》
 
二00四年十二月十日

附件
除菌产品除菌效果检测与评价方法
1．原理   皮肤菌群可分为常驻菌群与暂驻菌群两大类，前者由长期寄生在皮肤上的细菌构成，后者则是因接触环境而污染的各种细菌，包括革兰阳性菌和革兰阴性菌，可引起胃肠道疾病和皮肤感染。
 该方法是通过模拟的方法将实验菌污染于受试者手上，使用试验样品按标准化的方法洗手，然后观察其对暂驻菌群的消除情况，以确定产品的功效。
2．实验器材
（1） 实验样品：除菌洗手液25份
（2） 实验菌株：粘质沙雷氏菌（ATCC 14756）
（3） 培养基：胰蛋白酶大豆肉汤培养基
（4） 胰蛋白酶大豆琼脂培养基
（5） 洗脱液：0.4g KH2PO4、10.1gNa2HPO4 、1.0g Triton X-100
和中和剂（经鉴定合格）溶解于1L蒸馏水中,用0.1mol/LHCL或0.1mol/LNaOH调整pH至7.8。
（6） 稀释液：1.0ml吐温80、0.4g KH2PO4、10.1gNa2HPO4溶解于
1L蒸馏水中,调整pH至7.2。
（7） 振荡培养箱 温度范围25±2℃
（8） 自来水热水器  将自来水温度加热至40±2℃，用于洗手。
（9）培养箱 温度范围25±2℃
（10）菌落计数器
（11）塑料袋（25×35cm）
（12）70%异丙醇或75%的乙醇
3．实验方法
（1）调整阶段
试验前7至14天，受试者使用不含抗抑菌成分的香皂、洗发液和沐浴露进行日常的洗手、洗澡。此阶段至少持续7天。
（2）试验阶段
a.粘质沙雷氏菌的制备
将平皿或斜面培基上的单个菌落转种至10 ml胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）中，在25±2°C条件下，培养24±4小时。增菌成为粘质沙雷氏菌培养物。将该肉汤培养物再连续传两代，取0.1 ml肉汤培养物转种入含100 ml TBS的500ml三角烧瓶内，于25±2°C条件下，以100转/分钟的速度振荡培养24±4小时。使用时将细菌悬液浓度调整至1×108至1×109cfu/ml，使用时间不得超过8小时。
b.对照组实验方法
用40±2℃温水将受试者双手打湿5秒钟，注入1.8至2.0 ml
无抗菌成分的沐浴液在双手中，搓双手及腕部30秒钟，用温水从指尖到肘部冲洗30秒钟。（此时不要让手碰到水槽和其他物品，以免双手再被水槽等表面污染），用纸巾将受试者双手轻轻拍干，用70%异丙醇淋手心、手背10秒钟，双手对搓15秒钟， 然后温水冲洗15秒钟，用纸巾擦干双手。
人工污染方法  将总量为4.5 ml的粘质沙雷氏菌悬液分三次涂布于双手，每次1.5 ml，将液体涂遍双手至腕部，避开指甲床处，每次涂布时间为20秒钟。涂布菌液的手不得与身体接触，第一次和第二次涂菌后自然干燥30秒钟，第三次涂布后自然干燥90秒钟。
采样方法  将受试者左右手分别套上洁净塑料袋，灌入75 ml的含中和剂的洗脱液，对照组和试验组均使用同一种洗脱液。排出塑料袋内气体后，将腕部用儿童止血带扎紧，分别由两个工作人员同时按摩受试者的左、右手1分钟。 然后以无菌操作方法自塑料袋内取样5ml，放入试管内（注意勿触及手）。
c.实验组实验方法
用40±2℃温水冲洗受试者双手30秒，用70%异丙醇淋手心、手背10秒钟，双手对搓15秒钟，然后温水冲洗15秒钟，用纸巾擦干双手。将总量为4.5 ml的粘质沙雷氏菌悬液分三次涂布于双手，每次1.5 ml，方法与对照组相同。
除菌产品洗手方法  将手打湿5秒钟，注入1.8至2.0 ml除菌产品于双手中，搓双手及腕部30秒钟，温水冲洗30秒钟。
采样方法  将受试者左右手分别套上洁净塑料袋,灌入75 ml的含中和剂的洗脱液，排出塑料袋内气体后，将腕部用儿童止血带扎紧，分别由两个工作人员同时按摩受试者的左右手1分钟，取样方法与对照组相同。
d.双手试验后的消毒处理
试验完成后，受试者双手指尖向上，用70%异丙醇喷淋10秒钟，搓擦双手及腕部15秒钟，用流动温水冲洗15秒钟，然后用纸巾擦干。最后用4%葡萄糖酸洗必泰（Hibiclensâ）或其他合格的手消毒剂，对手和腕部消毒1分钟以上。
（3）细菌的接种与培养
按标准方法进行接种和菌落计数。经对照产品洗手之后，从每只袋中取0.5 ml未稀释样品，用稀释液做10倍系列稀释，分别取10-3、10-4和10-5三个稀释度的样品0.1ml各接种两块平皿。
经试验产品洗手之后，从每只袋中取0.1 ml未稀释样品接种两块平皿，然后再从每只袋中取0.5 ml未稀释样品，用稀释液做10倍系列稀释，分别取10-2、10-3和10-4 稀释度的样品0.1ml各接种两块平皿。 接种后置25±2°C培养48±4小时。 计数红色的粘质沙雷氏菌菌落。计数菌落数在15至300 cfu的平板上的菌落数，计算每份样品的菌落数。
（4）除菌对数值的计算
分别计算实验组和对照组左右手总菌数的平均值，并取其平均值对数值。
除菌平均对数值=对照组平均对数值-实验组平均对数值
4．判定标准
实验人数不得少于16人次，除菌平均对数值≥2.00，判定该产品有除菌作用。
5．注意事项
（1） 对受试者的要求
a.18—65岁，男女不限
b.有书面告知同意书
c.双手及腕部无皮肤病、创伤、指甲旁边的倒刺或其它皮肤疾病。
d.在洗手试验期间，受试者必须禁止局部或全身性使用抗生素、药物润肤液或霜剂、抗菌香皂、抗痤疮药物及去屑香波。此外，接触氯化物、家用清洁剂、有机溶剂或任何刺激性化学物质时必须戴橡胶手套。为保证试验的严格性，所有受试者统一配发无抗菌作用的香皂、香波、沐浴液。
（2） 受试者的排除标准
有下列情况之一者不得参加试验：
a.近期正在参与其它的临床研究
b.在过去的14天内曾参加过手、臂部清洗试验
c.双手或腕部有割伤、抓伤或任何其它皮肤损伤
d.对肥皂、去污剂及/或香水过敏
e.手、腕部有湿疹、牛皮癣或其他皮肤病
f.怀孕者
g.哺乳者
h.患有糖尿病、肝炎、艾滋病（或HIV阳性）、接受器官移植
i.患有任何其它被研究人员认为不宜参加试验的疾病
（3）其它限制
a.受试者不得使用任何其它个人清洁用品
b.受试者不得游泳和洗热水浴
c.受试者双手不得接触刺激性清洁剂、氯化物或有机溶剂

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